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牛活體取卵(OPU)是繼體外受精(IVF)和胚移植(ET)之后的用于牛胚胎實驗操作和生產繁殖的一項非常實用的胚胎工程技術。在20世紀80年代報道在B超監(jiān)視下施行0PU操作以來,這項技術已被廣泛用于牛胚胎體外生產。OPU這項技術具有應用廣泛、操作便利、高效和可重復性以及損傷小等優(yōu)點。通過聯(lián)合應用OPU和IVF這兩種技術,可充分提高良種牛的繁殖潛力和大量生產高質量的胚胎。
OPU操作參照前,母牛站立保定,2mL利多卡因尾硬膜外麻醉及1 mL“846合劑II”肌注。清除直腸糞便,清洗外陰部,并用0.1%新潔爾滅消毒外陰部。將帶有采卵針的探頭輕緩插到陰道穹隆,操作人員通過直腸隔著直腸壁將卵巢牽引至探頭端部,根據(jù)顯示屏圖像,調整卵巢和探頭的位置,使卵巢位于穿刺引導線上,推進采卵針,同時,用腳踏開關控制真空泵抽吸卵泡液,壓力在100 mmHg左右(除實驗1.3.4),用DPBS(含3%BSA和%2 U/mL肝素)沖洗采卵針和導管,沖洗液也一同放人收集管。所有≥2 mm的卵泡均被穿刺,記錄穿刺卵泡的數(shù)量。
OPU為體外生產高品質牛胚胎提供了一個有價值的方法。隨著牛基因組測序的完成,以及新的數(shù)量性狀位點的繪制[26I,通過牛0PU回收具有清晰遺傳背景的卵母細胞,將為在分子水平上研究牛胚胎發(fā)育提供寶貴的實驗材料,并最終為生產優(yōu)質牛胚胎產生顯著的經濟和實用價值。
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